Mutations in the bone morphogenetic protein 15 gene causing defective protein secretion in Cholistani infertile sheep / Mutações no gene da proteína morfogenética óssea 15 causadoras de defeitos na secreção proteica em ovelhas inférteis Cholistani

Naturally occurring mutations in morphogenetic protein 15 (BMP15) are associated with decreased ovulation rate (OR), litter size (LS), and sterility. It is of a great interest to elucidate BMP15 gene in Cholistani sheep breed to uplift socio-economic status and the knowledge of Cholistani sheep breeding in Southern Punjab, Pakistan. In our study, a total of 50 infertile Cholistani sheep aged between 2-6 years and having no blood relation were screened for BMP15 mutations. For this purpose, a high-quality DNA was extracted from the blood of sheep followed by primer designing, Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification, DNA sequencing, and in silico analyses. Out of total 50 samples, 9 samples including case 1 (T3), case 2 (T8), case 3 (T17), case 4 (T22), case 5 (T25), case 6 (T33), case 7 (T40), case 8 (T44), and case 9 (T47) were found positive for a variety of already reported and novel BMP15 mutations. Further in silico analyses of the observed mutations have shown the functional impact of these mutations on different characteristics (molecular weight, theoretical PI, estimated half-life, instability index, sub-cellular localization, and 3D confirmation) of the encoded proteins, possibly altering the normal functionality. In a nutshell, findings of this study have confirmed the possible essential role of the BMP15 mutations in the infertility of the Cholistani sheep.

Mutações de ocorrência natural na proteína morfogenética 15 (BMP15) estão associadas à diminuição da taxa de ovulação (TO), tamanho da ninhada (TN) e esterilidade. Estudar a BMP15 na raça Cholistani para elevar o status socioeconômico e o conhecimento da criação de ovinos Cholistani no sul de Punjab, Paquistão. Em nosso estudo, 50 ovelhas Cholistani inférteis sem parentesco sanguíneo foram rastreadas para mutações BMP15. Para tanto, um DNA de alta qualidade foi extraído do sangue dessas ovelhas, seguido de concepção do primer, amplificação da reação em cadeia da polimerase (PCR), sequenciamento de DNA e análises in silico. Do total de 50 amostras, 9, incluindo caso 1 (T3), caso 2 (T8), caso 3 (T17), caso 4 (T22), caso 5 (T25), caso 6 (T33), caso 7 (T40), caso 8 (T44) e caso 9 (T47), foram consideradas positivas para uma variedade de mutações BMP15 novas e já relatadas. Mais análises in silico das mutações observadas mostraram o impacto funcional dessas mutações em diferentes características (peso molecular, PI teórico, meia-vida estimada, índice de instabilidade, localização subcelular e confirmação 3D) das proteínas codificadas, possivelmente alterando a funcionalidade normal. Nossos achados confirmaram o possível papel essencial das mutações BMP15 na infertilidade de ovelhas Cholistani.

Mutations in the bone morphogenetic protein 15 gene causing defective protein secretion in Cholistani infertile sheep

Abstract Naturally occurring mutations in morphogenetic protein 15 (BMP15) are associated with decreased ovulation rate (OR), litter size (LS), and sterility. It is of a great interest to elucidate BMP15 gene in Cholistani sheep breed to uplift socio-economic status and the knowledge of Cholistani sheep breeding in Southern Punjab, Pakistan. In our study, a total of 50 infertile Cholistani sheep aged between 2-6 years and having no blood relation were screened for BMP15 mutations. For this purpose, a high-quality DNA was extracted from the blood of sheep followed by primer designing, Polymerase Chain Reaction (PCR) amplification, DNA sequencing, and in silico analyses. Out of total 50 samples, 9 samples including case 1 (T3), case 2 (T8), case 3 (T17), case 4 (T22), case 5 (T25), case 6 (T33), case 7 (T40), case 8 (T44), and case 9 (T47) were found positive for a variety of already reported and novel BMP15 mutations. Further in silico analyses of the observed mutations have shown the functional impact of these mutations on different characteristics (molecular weight, theoretical PI, estimated half-life, instability index, sub-cellular localization, and 3D confirmation) of the encoded proteins, possibly altering the normal functionality. In a nutshell, findings of this study have confirmed the possible essential role of the BMP15 mutations in the infertility of the Cholistani sheep.

Resumo Mutações de ocorrência natural na proteína morfogenética 15 (BMP15) estão associadas à diminuição da taxa de ovulação (TO), tamanho da ninhada (TN) e esterilidade. Estudar a BMP15 na raça Cholistani para elevar o status socioeconômico e o conhecimento da criação de ovinos Cholistani no sul de Punjab, Paquistão. Em nosso estudo, 50 ovelhas Cholistani inférteis sem parentesco sanguíneo foram rastreadas para mutações BMP15. Para tanto, um DNA de alta qualidade foi extraído do sangue dessas ovelhas, seguido de concepção do primer, amplificação da reação em cadeia da polimerase (PCR), sequenciamento de DNA e análises in silico. Do total de 50 amostras, 9, incluindo caso 1 (T3), caso 2 (T8), caso 3 (T17), caso 4 (T22), caso 5 (T25), caso 6 (T33), caso 7 (T40), caso 8 (T44) e caso 9 (T47), foram consideradas positivas para uma variedade de mutações BMP15 novas e já relatadas. Mais análises in silico das mutações observadas mostraram o impacto funcional dessas mutações em diferentes características (peso molecular, PI teórico, meia-vida estimada, índice de instabilidade, localização subcelular e confirmação 3D) das proteínas codificadas, possivelmente alterando a funcionalidade normal. Nossos achados confirmaram o possível papel essencial das mutações BMP15 na infertilidade de ovelhas Cholistani.

Efeito do cilostazol na produção in vitro de ovinos / Effect of cilostazol on in vitro production of sheep / Efecto del cilostazol en la producción in vitro de ovejas

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da inclusão de cilostazol no meio de maturação in vitro de oócitos sobre produção in vitro de embriões ovinos. Para isso, foram realizadas colheitas de oócitos oriundos de ovários obtidos em abatedouro por meio do método de aspiração folicular com bomba de vácuo. Os oócitos foram divididos em quatro grupos de maturação: grupo CON, onde os complexos cumulus oócitos foram imersos em TCM-199, suplementado com 500 UI de penicilina, 0,5 mg de estreptomicina, 1,25 µg de anfotericina, 0,2 mM de piruvato de sódio, 10% (v/v) de soro fetal bovino (SFB), 10 ng/mL de fator de crescimento epidérmico (EGF), 10 ug/m de FSH, 10 µg/mL de LH, 10 ug/mL de estradiol e 100 µM de cisteamina; e nos grupos CILO0,3; CILO1 e CILO10, os oócitos foram maturados no meio do grupo CON, mas sem a adição de cisteamina e suplementado com as concentrações de 0,3; 1 e 10 µM, respectivamente. Após 24h, os oócitos foram avaliados quanto a presença ou não de células do cumulus e quanto ao grau de expansão e destinados à fecundação in vitro, em meio FIV, juntamente com espermatozoides. Após a FIV, os presumíveis zigotos seguiram para o cultivo in vitro. Foram avaliadas clivagens no dia 2, sendo dia 0 o dia do início do CIV. Os resultados foram expressos em porcentagem e as variáveis de expansão das células do cumulus e número de estruturas clivadas foram comparadas por meio do teste qui-quadrado do software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EUA, 2021). Os resultados foram considerados significativos quando P<0,05. Em relação à expansão das células do cumulus, todos os grupos apresentaram 100% de expansão. Não houve diferenças significativas quanto ao grau de expansão das células do cumulus entre os grupos suplementados com cilostazol e cisteamina (P>0,05), assim como não houve diferenças significativas entre as taxas de clivagem entre os grupos suplementados com cilostazol e cisteamina (P > 0,05).

The objective of this study was to evaluate the effect of including cilostazol in the in vitro maturation medium of oocytes on the in vitro production of sheep embryos. Oocytes were collected from ovaries obtained from a slaughterhouse by follicular aspiration with a vacum pump. The oocytes were divided into four maturation groups: the CON group, where the cumulus-oocyte complexes were immersed in TCM-199 supplemented with 500 IU of penicillin, 0.5 mg of streptomycin, 1.25 µg of amphotericin, 0.2 mM of sodium pyruvate, 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS), 10 ng/mL of epidermal growth factor (EGF), 10 µg/mL of FSH, 10 µg/mL of LH, 10 µg/mL of estradiol, and 100 µM of cysteamine; and in the CILO0.3, CILO1, and CILO10 groups, the oocytes were matured in the CON group medium without the addition of cysteamine and supplemented with concentrations of 0.3, 1, and 10 µM of cilostazol, respectively. After 24 hours, the oocytes were evaluated for the presence or absence of cumulus cells and the degree of expansion and then subjected to in vitro fertilization (IVF) with sperm in FIV medium. After IVF, the presumptive zygotes were cultured in vitro. Cleavage was evaluated on day 2, with day 0 being the start of IVF. Results were expressed as a percentage, and variables such as cumulus cell expansion and the number of cleaved structures were compared using the chi-square test in the Epi Info software (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, USA, 2021). Results were considered significant when P < 0.05. All groups showed 100% cumulus cell expansion, and there were no significant differences in cumulus cell expansion degree between the cilostazol- and cysteamine-supplemented groups (P > 0.05), as well as no significant differences in cleavage rates between the cilostazol- and cysteamine-supplemented groups (P > 0.05).

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la inclusión de cilostazol en el medio de maduración in vitro de ovocitos sobre la producción in vitro de embriones ovinos. Para ello, se realizaron recolecciones de ovocitos provenientes de ovarios obtenidos en un matadero mediante el método de aspiración folicular con bomba de vacío. Los ovocitos se dividieron em cuatro grupos de maduración: grupo CON, donde los complejos cúmulus ovocitos se sumergieron en TCM-199, suplementado con 500 UI de penicilina, 0,5 mg de estreptomicina, 1,25 ug de anfotericina, 0,2 mM de piruvato de sodio, 10% (v/v) de suero fetal bovino (SFB), 10 ng/mL de factor de crecimiento epidérmico (EGF), 10 ug/m de FSH, 10 µg/mL de LH, 10 µg/mL de estradiol y 100 µM de cisteamina; y en los grupos CILO0,3; CILO1 y CILO10, los ovocitos se maduraron en el medio del grupo CON, pero sin la adición de cisteamina y suplementado con las concentraciones de 0,3; 1 y 10 µM, respectivamente. Después de 24 horas, los ovocitos se evaluaron en cuanto a la presencia o no de células del cúmulus y em cuanto al grado de expansión y se destinaron a la fecundación in vitro, en medio FIV, junto con espermatozoides. Después de la FIV, los presuntos cigotos siguieron para el cultivo in vitro. Se evaluaron las clivajes en el día 2, siendo el día 0 el día del início del CIV. Los resultados se expresaron en porcentaje y las variables de expansión de las células del cúmulos y número de estructuras clivadas se compararon mediante la prueba del chi-cuadrado del software Epi Info (Epi Info 7.2.5, Atlanta, GA, EE. UU., 2021). Los resultados se consideraron significativos cuando P < 0,05. En relación a la expansión de las células del cúmulus, todos los grupos presentaron el 100% de expansión. No hubo diferencias significativas en cuanto al grado de expansión de las células del cúmulus entre los grupos suplementados con cilostazol y cisteamina (P > 0.05), así como no hubo diferencias significativas entre las tasas de clivaje entre los grupos suplementados con cilostazol y cisteamina (P>0,05).

Presence of Chlamydia abortus in colostrum, milk, and vaginal discharge samples of sheep

Background: The main transmission route of Chlamydia abortus is by ingesting the microorganism that has been eliminated in vaginal secretions, placental membranes or abortions that contaminate the environment and, possibly, through milk and colostrum. Elimination through vaginal secretions is well documented. However, there are no reports about isolation and identification of C. abortus in the colostrum or milk of infected sheep, so it is important to determine whether or not C. abortus may be present in these secretions, which are the only food of lambs. Objective: To detect C. abortus in colostrum, milk, and vaginal secretions of sheep with a history of reproductive disorders. Methods: Colostrum, milk, and vaginal exudates were collected from 66 sheep. The samples were inoculated in mouse fibroblast cell cultures and the presence of C. abortus determined by direct immunofluorescence. Results: 19 out of 66 colostrum samples (28.7%), 14 out of 66 milk samples (21.2%) and 17 out of 66 vaginal swabs (25.7%) were positive for C. abortus. The 50 samples positive for isolation and detected by immunofluorescence, together with 42 negative samples were subjected to qPCR to amplify a fragment of the ompA gene from C. abortus. Thirty-eight of the 92 samples processed by this technique were positive for C. abortus. Conclusion: The results demonstrated the presence of C. abortus in a high proportion in colostrum, milk and vaginal secretions of infected sheep. To the best of our knowledge, this is the first field study confirming the presence of C. abortus in colostrum, which shows that excretion of Chlamydia by lactogenesis could occur in the first hours after birth.

Antecedentes: La principal vía de transmisión de C. abortus es la ingestión del microorganismo que ha sido eliminado en las secreciones vaginales, membranas placentarias, abortos y, posiblemente, a través de la leche y el calostro. La eliminación a través de secreciones vaginales está bien documentada. Sin embargo, no existen reportes del aislamiento e identificación de C. abortus en el calostro o la leche de ovejas infectadas, por lo que es importante determinar si la bacteria puede o no estar presente en estas secreciones, que son el único alimento de los corderos. Objetivo: Detectar la presencia de C. abortus in calostro, leche y secreciones vaginales de ovejas con antecedentes de problemas reproductivos. Método: Con el propósito de aislar e identificar C. abortus en estas secreciones, se recolectó calostro, leche y exudado vaginal de 66 ovejas. Las muestras fueron inoculadas en cultivos celulares de fibroblastos de ratón y se determinó la presencia de la bacteria por inmunofluorescencia directa. Resultados: Fueron positivas 19 de 66 muestras de calostro (28,7%), 14 de 66 muestras de leche (21,2%) y 17 de 66 hisopos vaginales (25,7%). Las 50 muestras positivas al aislamiento y detectadas por inmunofluorescencia, junto con 42 negativas se sometieron a qPCR para amplificar un fragmento del gen ompA de C. abortus; 38 de las 92 muestras procesadas por esta técnica fueron positivas para C. abortus. Conclusión: Los resultados del presente estudio demostraron la presencia de C. abortus en una alta proporción en el calostro, la leche y las secreciones vaginales de ovejas infectadas. Este es el primer estudio de campo que confirma la presencia de C. abortus en calostro, lo que demuestra que la excreción de clamidia por lactogénesis podría ocurrir en las primeras horas después del nacimiento.

Antecedentes: A principal via de transmissão da Chlamydia abortus é a ingestão do microrganismo que foi eliminado nas secreções vaginais, membranas placentárias ou abortos que contaminam o meio ambiente e, possivelmente, através do leite e colostro. A eliminação pelas secreções vaginais está bem documentada. No entanto, não há relatos de isolamento e identificação de C. Abortus no colostro ou leite de ovelhas infectadas, por isso é importante verificar se a bactéria pode estar ou não presente nessas secreções, único alimento dos cordeiros. Objetivo: Detectar a presença de C. Abortus no colostro, leite e secreções vaginais de ovelhas com histórico de distúrbios reprodutivos Métodos: Para isolar e identificar C. Abortus nessas secreções, foram coletados colostro, leite e exsudato vaginal de 66 ovelhas. As amostras foram inoculadas em cultura de células de fibroblastos de camundongo e a presença da bactéria determinada por imunofluorescência direta. Resultados: 19 de 66 amostras de colostro (28,7%), 14 de 66 amostras de leite (21,2%) e 17 de 66 esfregaços vaginais (25,7%) sendo positivos. As 50 amostras positivas para isolamento e detectadas por imunofluorescência, juntamente com as 42 negativas, foram submetidas a qPCR para amplificar um fragmento do gene ompA de C. Abortus. Trinta e oito das 92 amostras processadas por esta técnica foram positivas para C. Abortus. Conclusão: Os resultados do presente estudo demonstraram a presença de C. Abortus em alta proporção no colostro, leite e secreções vaginais de ovelhas infectadas. Este trabalho é o primeiro estudo de campo na literatura científica confirmando a presença de C. Abortus no colostro, o que mostra que a excreção da clamídia por lactogênese pode ocorrer nas primeiras horas após o nascimento.

Sheep as a large animal model for cochlear implantation / Uso de ovelhas como um modelo animal de grande porte para implante coclear

Abstract Introduction In surgical training, large animal models are more suitable as their anatomy is more similar to humans. In otology, there have been relatively few studies about large animal models for surgical training. Objective In this study, we aimed to do a neuroradiologic evaluation and surgical insertion of a cochlear implant electrode array on a sheep head model. Methods Twenty cadaveric sheep heads were studied. A computed tomography scan and neuroradiologic evaluation was performed on each head, obtaining measurements of the inner ear for each sheep. Sheep measurements were compared to those from temporal bone computed tomography scans from 20 female humans. Surgical procedures were first trained with 13 of the sheep temporal bones, after which cochlear implantation was performed on the remaining 7 temporal bones. The position of the inserted electrode array insertion was confirmed by computed tomography scan after the procedure. Results Neuroradiologic evaluation showed that, relative to the 20 female humans, the mean ratio for sheep was 0.60 for volume of cochlea, 0.70 for height of cochlea, 0.73 for length of cochlea; ratios for other metrics were >0.80. For the surgical training, the round window was found in all 20 sheep temporal bones. Computed tomography scans confirmed that electrode insertions were fully complete; the mean value of electrode array insertion was 18.3 mm. Conclusion The neuroradiologic and surgical training data suggest that the sheep is a realistic animal model to train cochlear implant surgery and collection of perilymph samples, but less so for surgical training of mastoidectomy due to pneumatization of the mastoid.

Resumo Introdução No treinamento cirúrgico, os modelos animais de grande porte são mais adequados, pois sua anatomia é mais semelhante à humana. Em otologia, existem relativamente poucos estudos com modelo animal de grande porte para treinamento cirúrgico. Objetivo Fazer a avaliação neurorradiológica e a inserção cirúrgica de um eletrodo de implante coclear em um modelo de ovelha. Método Vinte cabeças de cadáveres de ovelhas foram estudadas. Foram feitas tomografia computadorizada e avaliação neurorradiológica de cada cabeça, obtiveram‐se medidas da orelha interna de cada ovelha. As medidas das ovelhas foram comparadas às de tomografias computadorizadas do osso temporal de 20 mulheres. Os procedimentos cirúrgicos foram inicialmente treinados com 13 dos ossos temporais de ovelhas, após o qual o implante coclear foi feito nos 7 ossos temporais restantes. A posição de inserção do arranjo de eletrodos foi confirmada por tomografia computadorizada após o procedimento. Resultados A avaliação neurorradiológica mostrou que, em comparação às 20 mulheres, a proporção média para as ovelhas foi de 0,60 para o volume da cóclea, 0,70 para a altura da cóclea, 0,73 para o comprimento da cóclea; as proporções para as outras medidas foram > 0,80. Em relação ao treinamento cirúrgico, a janela redonda foi encontrada em todos os 20 ossos temporais de ovelhas. A tomografia computadorizada confirmou que as inserções dos eletrodos foram totalmente completas; o valor médio da inserção do arranjo de eletrodos foi de 18,3 mm. Conclusão Os dados do treinamento neurorradiológico e cirúrgico sugerem que a ovelha é um modelo animal realista para o treinamento da cirurgia de implante coclear e coleta de amostras da perilinfa, mas não tão realista para o treinamento cirúrgico de mastoidectomia devido à pneumatização da mastoide.

Antihelminthic action of the Anethum graveolens essential oil on Haemonchus contortus eggs and larvae / Ação anti-helmítica do óleo essencial de Anethum graveolens sobre ovos e larvas de Haemonchus contortus

Abstract Gastrointestinal nematodes are responsible for great economic losses in sheep raising, and their control has long been carried out almost exclusively by the administration of anthelmintics, which have led to serious resistance problems. In the search for alternative control measures, phytotherapic research is highlighted. The aim of this study was to evaluate the action of Anethum graveolens (dill) essential oil on different stages of Haemonchus contortus life cycle, as well its cytotoxicity MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells. H. contortus larvae and eggs were obtained from infected sheep feces, and essential oil extracted from plant seeds through the Clevenger apparatus. 9.4, 4.7, 2.35, 1.17. 0.58 and 0.29 mg/mL concentrations were evaluated. The Egg Hatch Inhibition (HI), Larval Development Inhibition (LDI) and Larval Migration Inhibition (LMI) techniques were used. Thybendazole 0.025 mg/mL in HI and Levamisole 0.02 mg/mL in the LDI and LMI tests were used as positive controls, while distilled water and a Tween 80 solution were used as positive negative controls. The inhibition results obtained for the highest oil concentration were: HI 100%, LDI 98.58% and LMI 63.7%, differing (�� <0.05) from negative controls. Main A. graveolens oil components present in 95.93% of the total oil were Dihydrocarvone (39.1%), Carvone (22.24%), D-Limonene (16.84%), Apiol (10.49%) and Trans-dihydrocarvone (7.26%). Minimum A. graveolens essential oil concentrations required to inhibit 50% (IC50) of egg hatching, larval development and larval migration were 0.006 mg/mL, 2.536 mg/mL and 3.963 mg/mL, respectively. Cell viability in MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells, when incubated with A. graveolens essential oil, was 86% for the highest (9.4 mg/mL) and 99% for the lowest concentration (0.29 mg/mL). A. graveolens essential oil, according to the results obtained in this study, is a promising alternative in sheep gastrointestinal nematode control.

Resumo Os nematoides gastrintestinais são responsáveis ​​por grandes perdas econômicas na ovinocultura, e seu controle tem sido realizado quase exclusivamente pela administração de anti-helmínticos, que levaram a sérios problemas de resistência. Na busca de medidas alternativas de controle, destaca-se a pesquisa fitoterápica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação do óleo essencial de Anethum graveolens (endro) em diferentes estágios de Haemonchus contortus, bem como testar a viabilidade celular para o óleo. Larvas e ovos de H. contortus foram obtidos de fezes de ovinos infectados e óleo essencial extraído de sementes de plantas através do aparelho de Clevenger. As concentrações avaliadas foram 9,4, 4,7, 2,35, 1,17, 0,58 e 0,29 mg/mL. Verificou-se a Inibição de eclosão dos ovos (IE), Inibição de Desenvolvimento Larval (IDL) e Inibição de Migração Larval (IML). Tiabendazol 0,025 mg/mL em IE e Levamisole 0.02 mg/mL nos testes IDL e IML foram usados ​​como controles positivos, enquanto água destilada e uma solução Tween 80 foram usados como controles negativos. Os resultados de inibição obtidos para a maior concentração de óleo foram: IE 100%, IDL 98,58% e IML 63,7%, diferindo (�� <0,05) dos controles negativos. Os principais componentes presentes em 95,93% do óleo total de A. graveolens foram Di-hidrocarvona (39,1%), Carvona (22,24%), D-Limoneno (16,84%), Apiol (10,49%) e Trans-di-hidrocarvona (7,26%). As concentrações mínimas de óleo essencial de A. graveolens necessárias para inibir 50% (IC50) de eclosão dos ovos, desenvolvimento larval e migração larval foram de 0,006 mg/mL, 2,536 mg/mL e 3,963 mg/mL, respectivamente. A viabilidade celular nas células MDBK (rim bovino Madin-Darby), quando incubadas com o óleo essencial de A. graveolens, foi de 86% para a maior (9,4 mg/mL) e 99% para a menor concentração (0,29 mg/mL). O óleo essencial de A. graveolens mostrou ser uma alternativa promissora no controle de nematoides gastrintestinais de ovinos.

Anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state, South Brazil: prevalence and associated factors / Anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum em ovinos do estado do Paraná, sul do Brasil: prevalência e fatores associados

Abstract The aim of this study was to evaluate the seroprevalence and factors associated with the presence of anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in sheep from Paraná state. The detection of antibodies for T. gondii and N. caninum was performed by homemade and commercial indirect ELISA, respectively. Multiple logistic regression analysis was used to verify the factors associated with the seroprevalence. Antibodies anti-T. gondii and anti-N. caninum were observed in 42.7% and in 17.6% of the animals, respectively. The protective factors associated to seropositive were "some level of confinement" (full or semi-extensive confinement) (OR=0.53) for T. gondii and "use of skilled labor" (OR=0.64) for N. caninum. The risk factors were "presence of cats" (OR=1.75) for T. gondii and "feeding of dogs with sheep placental remains" (OR=1.79) for N. caninum. In addition, to presenting a significant and simultaneous seroprevalence for both agents (9.9% of the animals), the results also indicate that deficiencies in management and environmental sanitation, the presence of reservoirs, and types of exploitation enhance the seropositivity. Thus, studies like this might support sanitary programs and public policies for the prevention of T. gondii and N. caninum in the sheep herds of Paraná state.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a soroprevalência e os fatores de risco associados à presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos do Paraná. A detecção dos anticorpos para T. gondii e N. caninum foi realizada, usando-se testes de ELISA indireto caseiro e comercial, respectivamente. A análise de regressão logística múltipla foi usada para verificar os fatores de risco associados à soroprevalência. Anticorpos anti-T. gondii e anti-N. caninum foram observados em 42,7% e em 17,6% dos animais, respectivamente. Os fatores de proteção associados à soropositividade foram "algum nível de confinamento (confinamento ou semiextensivo)" (OR=0,53) para T. gondii e "presença de mão de obra especializada" para N. caminum (OR=0,64). Os fatores de risco foram "presença de gatos" para T. gondii (OR=1,75) e "alimentação de cães com resíduos placentários" (OR=1,79) para N. caninum. Além de apresentar uma significante e simultânea soroprevalência para ambos os agentes (9,9% dos animais), os resultados também indicam que as deficiências em gestão e saneamento ambiental, a presença de reservatórios e os tipos de exploração favorecem a soropositividade. Dessa forma, estudos como estes podem auxiliar em programas sanitários e políticas públicas para a prevenção de T. gondii e N. caninum nos rebanhos ovinos do Paraná.

Avaliação da atividade funcional dos neutrófilos sanguíneos em ovelhas primíparas e pluríparas da raça Lacaune / [Functional evaluation of blood neutrophils in primiparous and pluriparous Lacaune ewes]

This study aimed to evaluate the neutrophil oxidative metabolism and phagocytosis of Zymonsan particles of primiparous and pluriparous Lacaune ewes during the first 30 days after lambing. A total of 20 ewes were evaluated, 10 primiparous (GPR) and 10 pluriparous (GPL). Evaluation of basal oxidative metabolism was performed using the nitroblue tetrazolium (NBT) technique, stimulating neutrophil phagocytosis with Zymosan particles. Blood samples were collected at parturition day (M1) and 1, 3, 7, 15 and 30 days after parturition, corresponding to M2, M3, M4, M5 and M6, respectively. In relation to the groups, GPR presented lower oxidative basal metabolism neutrophils in M1 compared to M4, in M3 with M1, M2, M4 and M5. In M4 and M5 differences were found at all times and in M6 with M4 and M5. Higher percentage of neutrophils than phagocytes were found in M4, M5 and M6 than in M1 and M2 in GPL animals. At all times GPR presented a lower percentage of phagocytosis than GPL. Thus it is concluded that the immune response in pluriparous sheep was more efficient than in primiparous sheep.(AU)

Pesquisa de parâmetros microbiológicos de qualidade em leite ovino de conjunto / Research of quality microbial parameters in ewe milk

Com o objetivo avaliar a qualidade microbiológica do leite de ovelha in natura, coletaram-se mensalmente amostras de leite do tanque de expansão ou tarros, em quatro unidades produtivas (UP). Não foi evidenciada a presença de Salmonella contudo, isolaram-se E. coli (3 UP), S. aureus e L. murrayi (1 UP). Observaram-se coágulos homogêneos (38,7%) (sugestivo de bactérias láticas) e sem líquido (38,7%) (indicativo da presença de inibidores bacterianos). O teste de redutase indicou a maioria (54,8%) das amostras com qualidade muito boa e a contagem média de mesófilos foi 2x107UFC/mL e de coliformes termotolerantes de 2x106 UFC/mL. Os microrganismos isolados, assim como os resultados das provas de lactofermentação e redutase, foram indicativos da adoção de práticas de higiene ineficientes das instalações ou do sistema de ordenha, passíveis de correção por meio de manejo adequado.

Efeito do óleo essencial do Croton nepetifolius Baill na penetração cervical em ovelhas mestiças de Dorper e Santa Inês / Effect of the essential oil of Croton nepetifolius Baill on cervical penetration in crossbred Dorper and Santa Inês ewes

A fim de se avaliar o uso do óleo essencial de Croton nepetifolius Baill (OECn) na penetrabilidade cervical em ovelhas mestiças, 40 ovelhas foram distribuídas ao acaso em quatro grupos (n=10): controle, misoprostol, OECn50 e OECn100 (50 e 100µg do OECn, respectivamente). Após a sincronização do estro, utilizando CIDR e eCG (200UI), a profundidade de penetração da cérvix foi mensurada utilizando-se uma pipeta de inseminação artificial de bovino graduada, no período de zero até 72h após a retirada do CIDR. Os resultados foram expressos em média ± erro-padrão, submetidos à ANOVA seguida do teste de Tukey, enquanto os dados, em porcentagem, foram submetidos aos testes de Fisher ouqui-quadrado. Nenhuma diferença significativa (P>0,05) foi encontrada quanto ao grau de penetrabilidade cervical. Quanto ao tempo de passagem, os grupos misoprostol e OECn100 apresentaram um menor tempo de penetrabilidade às 60h(1,7±0,6 e 1,5±0,6min, respectivamente), quando comparados ao grupo controle (4,1±0,6min), que não diferiu significativamente do grupo OECn50 (2,3±0,6min). Portanto, o óleo essencial de Croton nepetifolius Baill pode ser utilizado para encurtar o tempo de penetrabilidade cervical em ovelhas submetidas à sincronização estral.(AU)

In order to evaluate the use of the essential oil of Croton nepetifolius Baill (EOCn) on cervical penetration in crossbred ewes, 40 ewes were randomly allocated into four groups (n= 10): CONTROL, MISOPROSTOL, EOCn50 and EOCn100 (50 e 100µg of the EOCn, respectively). After estrus synchronization, using CIDR and eCG (200IU), depth of cervical penetration was measured using artificial insemination gun for bovine species which was graduated and used from 0 to 72h after CIDR removal. Results were expressed as mean ± standard error mean, submitted to ANOVA and Tukey test while data in percentage were submitted to Fisher or Chi-Square test. No significant difference (P> 0.05) was observed at grade of cervical penetration. Concerning trespassing time, MISOPROTOL and EOCn100 groups presented a lower trespassing time at 60h (1.7±0.6 and 1.5±0.6min, respectively) than CONTROL group (4.1±0.6min), which did not differ significantly from EOCn50 (2.3±0.6min) group. Therefore, the essential oil of Croton nepetifolius Baill can be used to shorten the cervical penetration time in estrus synchronized ewes.(AU)

DNA damage and primordial follicle activation after in vitro culture of sheep ovarian cortex in Morus nigra leaf extract / Dano ao DNA e ativação do folículo primordial após a cultivo in vitro do córtex ovariano de ovelha em extrato de folha de Morus nigra

This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.(AU)

Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.(AU)

Milk from different species on physicochemical and microstructural yoghurt properties / Influência do leite de diferentes espécies nas propriedades físico-químicas e micro estruturais do iogurte

ABSTRACT: The aim of the present research was to evaluate differences in chemical properties and physical structure of yoghurt produced with milk from different species (sheep, cow, and goat). For each trial, whole raw sheep (S), cow (C), and goat (G) milk were used to manufacture 4L of yoghurts (Y) from each species (SY, CY, and GY, respectively). The SY demonstrated the greatest (P<0.05) values of total solids, protein, and lipid contents, reflecting on greater (P<0.05) firmness, apparent viscosity and water-holding capacity, and lower (P<0.05) syneresis index than CY and GY. Consequently, SY exhibited a more compact microstructure and homogeneous matrix with fewer pores. Furthermore, CY and GY microstructure contained a greater number of pores, which exhibited greater size heterogeneity than SY. Therefore, based on the evaluated physicochemical and microstructural properties of yoghurt, SY demonstrated the most desirable parameter values for dairy industry representing an alternative substitution for cow's milk yogurt.

RESUMO: O objetivo da presente pesquisa foi avaliar as diferenças nas propriedades químicas e na estrutura física do iogurte produzido com leite de diferentes espécies (ovinos, bovinos e caprinos). Para cada experimento, leite de ovelha cru (S), vaca (C) e cabra (G), foram usados para fabricar 4L de iogurtes (Y) de cada espécie (SY, CY e GY, respectivamente). O SY demonstrou os maiores (P<0,05) valores de sólidos totais, proteína e conteúdo lipídico, refletindo em maior (P<0,05) firmeza, viscosidade aparente e capacidade de retenção de água e menor (P<0,05) índice de sinérese do que CY e GY. Consequentemente, o SY exibiu uma microestrutura mais compacta e uma matriz homogênea com menos poros. Além disso, a microestrutura CY e GY continha um maior número de poros, que exibiam maior heterogeneidade de tamanho do que o SY. Portanto, com base nas propriedades físico-químicas e micro estruturais avaliadas do iogurte, o SY demonstrou os valores de parâmetros mais desejáveis para a indústria de laticínios, representando uma alternativa de produto adequada aos iogurtes à base de leite de vaca.

Survey of mutations in prolificacy genes in Santa Ines and Morada Nova sheep / Pesquisa de mutações em genes da prolificidade em ovelhas Santa Inês e Morada Nova

Polymorphisms in the BMP-15 gene related to Galway (FecXG) and Inverdale (FecXI) and in the BMPR-1B gene known as Booroola (FecB) mutations were investigated using the Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) method, on sheep from the breeds Santa Inês (n= 574) and Morada Nova (n=282). DNA was extracted and amplified through PCR with specific primers that introduced a restriction site in association with the mutation. The PCR products were submitted to endonucleases. The experiment found no FecXG and FecXI mutations. Six samples of animals with multiple offspring/birth history presented polymorphism for FecB similar to control samples, but this pattern was not confirmed by nucleotide sequencing. Although the absence of these mutations in the studied breeds, other factors related to prolificacy should be investigated to explain the inherent prolificity mechanisms.(AU)

Polimorfismos Galway (Fec XG ) e Inverdale (Fec XI), relacionados ao gene BMP-15, e Booroola (FecB), localizado no gene BMPR-1B, foram investigados usando-se a técnica de reação em cadeia da polimerase - polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP), em ovelhas Santa Inês (n= 574) e Morada Nova (n=282). O DNA foi extraído e amplificado por PCR com iniciadores específicos, que introduziram um sítio de restrição associado à mutação, em seguida os amplicons foram submetidos à ação de endonucleases. Não foram observadas as mutações Fec XG e Fec XI nas amostras estudadas. Amostras de seis animais com histórico de partos gemelares apresentaram polimorfismo para FecB semelhantes às amostras controle, mas esse padrão não foi confirmado pelo sequenciamento de nucleotídeos. Apesar da ausência dessas mutações nos animais das raças estudadas, outros fatores relacionados à prolificidade devem ser pesquisados para explicar os mecanismos da alta prolificidade desses animais.(AU)

Clinical, pathological and molecular evaluations and CT scan screening of coenurosis (Coenurus cerebralis) in sheep and calves / Avaliação clínica, patológica e molecular e tomografia computadorizada de cenurose (Coenurus cerebralis) em carneiros e bezerros

Abstract The aims of this study were to diagnose coenurosis by means of computerized tomography (CT) scan imaging and molecular characterization of the CO1 gene using the polymerase chain reaction (PCR). Sheep and calves were necropsied, and CT scans on the cephalic region were performed on the animals. Sections of brain tissue infected with parasites were then stained with hematoxylin and eosin for microscopic examination. Material collected from brain cysts was fixed in 70% ethanol. PCR amplification was carried out using the CO1 mitochondrial gene. A total of 60 calves and 80 sheep were examined clinically and, of these, 15 calves and 38 sheep showed signs of depression, with counterclockwise circling movements and altered head carriage. Four sheep and one calf were necropsied, and C. cerebralis cysts were detected in all of them. A hypodense cyst was monitored in the right cerebellar hemisphere on a CT scan on one sheep. A cyst was found in the left frontal lobe on a CT scan on one calf. Microscopically, C. cerebralis cysts were surrounded by a fibrous or epithelial wall that presented necrosis on cerebral sections of both the sheep and the cattle. The CO1-PCR assay yielded a 446 bp band, which was sequenced and phylogenetically analyzed: the results confirmed the presence of T. multiceps. This study reports the first use of CT imaging on naturally infected calves and sheep for diagnosing coenurosis.

Resumo Os objetivos deste estudo foram diagnosticar cenurose por tomografia computadorizada (CT) por imagem de digitalização e caracterização molecular do gene CO1, usando a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Ovelhas e bezerros foram necropsiados, e uma tomografia computadorizada da região cefálica foi realizada nos animais. Em seguida, cortes microscópicos de cérebro infectado com parasitas foram corados com hematoxilina e eosina e posterior avaliação ao microscópio de luz. Em seguida, o material recolhido de cada cisto cerebral foi fixado em etanol a 70%. A amplificação pela PCR foi realizada utilizando-se o gene mitocondrial CO1. Um total de 60 bezerros e 80 ovelhas foram clinicamente examinados e, desses, 15 bezerros e 38 ovelhas apresentaram sinais de depressão, com movimentos circulares em sentido anti-horário, e desvio da cabeça. Quatro carneiros e uma vitela foram necropsiados, e cistos de C. cerebralis foram detectados nos animais. Um cisto hipodenso foi monitorado no hemisfério cerebelar direito por imagem do CT de um carneiro. O cisto foi encontrado no lobo frontal esquerdo por imagem do CT de um bezerro. Microscopicamente, cistos de C. cerebralis foram envolvidos por uma parede fibrosa ou epitelial, apresentando necrose em ambos os cortes cerebrais de ovinos e de bovinos. O ensaio CO1-PCR produziu uma banda de 446 pb, sequenciado e submetido à filogenia, confirmou ser T. multiceps. Este estudo relata a primeira utilização de imagens de CT em bezerros e ovelhas naturalmente infectados para o diagnóstico de coenurosis.

In vitro culture of ovine mammary gland cells expressing beta-lactoglobulin and beta-casein / Células da glândula mamária ovina cultivadas in vitro expressam beta-lactoglobulina e beta-caseina

The expression of milk proteins in vitro is essential to exploit the mammary gland cells as a biological model. Enzymatic tissue disaggregation has been widely used to establish mammary cell culture, but its effect in long-term ovine mammary cell culture is not completely elucidated. This study aimed at comparing mechanical/enzymatic and mechanical dissociation methods to establish ovine mammary cell culture. We compared cellular differentiation induced by lactating ewe serum or fetal bovine serum based on the gene expression levels of milk proteins (beta-lactoglobulin, alpha s1-casein, and betacasein). Mechanically dissociated cells were positive immunostaining for cytokeratin 8.13, such as mammary epithelial cells. These cells are responsible for milk protein expression and they are low immunostaining for vimentin, mesenchymal marker. Mechanical/enzymatic dissociation cells were positive for vimentin. The fastest cell growth (cell/hour) was observed in the mechanical dissociation group cultured with 10% fetal bovine serum medium. Mechanically and mechanically/enzymatically derived cells were able to express beta-casein and beta-lactoglobulin, but not alpha s1-casein. The relative expression of beta-lactoglobulin was not affected by the tissue dissociation method or culture media, beta-casein relative expression was down regulated in mechanically dissociated cells cultured in the presence of lactating ewe serum, (P = 0.019). Beta-casein relative expression was also down regulated in mechanically/enzymatically dissociated cells cultured with fetal bovine serum (P = 0.021). In the present conditions, we conclude that mechanical dissociation followed by culture with 10% of fetal bovine serum was the most efficient method to induce milk proteins' mRNA expression by ovine mammary epithelial cells in vitro.(AU)

A expressão in vitro de proteínas do leite é essencial para explorar as células da glândula mamária como um modelo biológico. A desagregação tecidual via enzimática é amplamente utilizada para o estabelecimento cultivo de células mamárias. No entanto, seu efeito a longo prazo no cultivo de células da glândula mamária ovina ainda não é bem elucidado. Este estudo tem como objetivo comparar dois métodos de dissociação tecidual, mecânico/enzimático e mecânico, para estabelecer cultivo celular de glândula mamária ovina. A indução da diferenciação celular, por adição de soro de ovelha lactante ou soro fetal bovino, foi avaliada pelos níveis de expressão de proteínas do leite (beta-lactoglobulina, alpha s1-caseína e beta-caseína). Células mecanicamente dissociadas foram positivamente marcadas para a presença de citoqueratina 8.13, marcador para células epiteliais mamárias. Essas células são as responsáveis pela produção das proteínas do leite e são pouco marcadas para a presença de vimentina, marcador para células de origem mesenquimal. Já as células obtidas da dissociação mecânica/ enzimática foram positivamente marcadas para presença de vimentina. A maior velocidade de crescimento (células/hora) foi observado para o grupo com dissociação mecânica cultivado em meio com 10% de soro fetal bovino. As células obtidas tanto da dissociação mecânica quanto mecânica/enzimática foram capazes de expressar beta-lactoglobulina e beta-caseína, mas não alfa s1-caseína. A expressão relativa de beta-lactoglobulina não foi afetada pelo método de dissociação ou meio de cultivo. A expressão relativa da beta-caseína foi negativamente regulada para células mecanicamente dissociadas e cultivadas na presença de soro de ovelha lactante (P = 0,019). A expressão relativa da beta-caseína também foi negativamente regulada para células dissociadas de forma mecânica/enzimática e cultivadas com soro fetal bovino (P = 0,021). Nas condições do presente estudo, concluímos que o método de dissociação mecânica seguido pelo cultivo em meio com 10% de soro fetal bovino foi o método mais eficiente para induzir a expressão mRNA de proteínas do leite por células epiteliais mamárias ovinas in vitro.(AU)

Antihelminthic action of the Anethum graveolens essential oil on Haemonchus contortus eggs and larvae

Abstract Gastrointestinal nematodes are responsible for great economic losses in sheep raising, and their control has long been carried out almost exclusively by the administration of anthelmintics, which have led to serious resistance problems. In the search for alternative control measures, phytotherapic research is highlighted. The aim of this study was to evaluate the action of Anethum graveolens (dill) essential oil on different stages of Haemonchus contortus life cycle, as well its cytotoxicity MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells. H. contortus larvae and eggs were obtained from infected sheep feces, and essential oil extracted from plant seeds through the Clevenger apparatus. 9.4, 4.7, 2.35, 1.17. 0.58 and 0.29 mg/mL concentrations were evaluated. The Egg Hatch Inhibition (HI), Larval Development Inhibition (LDI) and Larval Migration Inhibition (LMI) techniques were used. Thybendazole 0.025 mg/mL in HI and Levamisole 0.02 mg/mL in the LDI and LMI tests were used as positive controls, while distilled water and a Tween 80 solution were used as positive negative controls. The inhibition results obtained for the highest oil concentration were: HI 100%, LDI 98.58% and LMI 63.7%, differing ( 0.05) from negative controls. Main A. graveolens oil components present in 95.93% of the total oil were Dihydrocarvone (39.1%), Carvone (22.24%), D-Limonene (16.84%), Apiol (10.49%) and Trans-dihydrocarvone (7.26%). Minimum A. graveolens essential oil concentrations required to inhibit 50% (IC50) of egg hatching, larval development and larval migration were 0.006 mg/mL, 2.536 mg/mL and 3.963 mg/mL, respectively. Cell viability in MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells, when incubated with A. graveolens essential oil, was 86% for the highest (9.4 mg/mL) and 99% for the lowest concentration (0.29 mg/mL). A. graveolens essential oil, according to the results obtained in this study, is a promising alternative in sheep gastrointestinal nematode control.

Resumo Os nematoides gastrintestinais são responsáveis por grandes perdas econômicas na ovinocultura, e seu controle tem sido realizado quase exclusivamente pela administração de anti-helmínticos, que levaram a sérios problemas de resistência. Na busca de medidas alternativas de controle, destaca-se a pesquisa fitoterápica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação do óleo essencial de Anethum graveolens (endro) em diferentes estágios de Haemonchus contortus, bem como testar a viabilidade celular para o óleo. Larvas e ovos de H. contortus foram obtidos de fezes de ovinos infectados e óleo essencial extraído de sementes de plantas através do aparelho de Clevenger. As concentrações avaliadas foram 9,4, 4,7, 2,35, 1,17, 0,58 e 0,29 mg/mL. Verificou-se a Inibição de eclosão dos ovos (IE), Inibição de Desenvolvimento Larval (IDL) e Inibição de Migração Larval (IML). Tiabendazol 0,025 mg/mL em IE e Levamisole 0.02 mg/mL nos testes IDL e IML foram usados como controles positivos, enquanto água destilada e uma solução Tween 80 foram usados como controles negativos. Os resultados de inibição obtidos para a maior concentração de óleo foram: IE 100%, IDL 98,58% e IML 63,7%, diferindo ( 0,05) dos controles negativos. Os principais componentes presentes em 95,93% do óleo total de A. graveolens foram Di-hidrocarvona (39,1%), Carvona (22,24%), D-Limoneno (16,84%), Apiol (10,49%) e Trans-di-hidrocarvona (7,26%). As concentrações mínimas de óleo essencial de A. graveolens necessárias para inibir 50% (IC50) de eclosão dos ovos, desenvolvimento larval e migração larval foram de 0,006 mg/mL, 2,536 mg/mL e 3,963 mg/mL, respectivamente. A viabilidade celular nas células MDBK (rim bovino Madin-Darby), quando incubadas com o óleo essencial de A. graveolens, foi de 86% para a maior (9,4 mg/mL) e 99% para a menor concentração (0,29 mg/mL). O óleo essencial de A. graveolens mostrou ser uma alternativa promissora no controle de nematoides gastrintestinais de ovinos.

Aceitabilidade e intenção de compra de queijo tipo pecorino produzido com leite ovino / Acceptability and intention to buy pecorino cheese produced with sheep's milk

O Pecorino é um dos queijos mais conhecidos e antigos do mundo e é produzido com leite de ovelha. No Brasil, o leite desta espécie é utilizado, principalmente, na fabricação de queijo. O objetivo do presente estudo foi determinar a aceitabilidade e a intenção de compra do queijo tipo Pecorino produzido em Santa Catarina, Brasil. Para tanto, dois produtos (QUEIJO1 ­ produzido com leite ovino pasteurizado e sob Inspeção Federal; QUEIJO2 ­ produzido com leite ovino não pasteurizado e sob inspeção estadual) foram oferecidos a 68 avaliadores não treinados. A maioria (58,8%) dos avaliadores gostou muito do Queijo 1 e, em menor proporção, gostou (37,9%) do Queijo 2. Da mesma forma, 50% e 41,2% dos avaliadores certamente comprariam os produtos 1 e 2, respectivamente. O Queijo1 obteve maior aceitabilidade e intenção de compra. Pode-se concluir que a decisão de compra de um produto está diretamente relacionada à aceitabilidade do mesmo.

Pecorino is one of the most known and ancient cheese of the world and it is produced with ewe milk. In Brazil, the milk of this specie is used in the manufacturing cheese, mainly. The aim of this study was to determine the acceptability and purchase intention of the Pecorino cheese produced in Santa Catarina, Brazil. For that purpose, two products (CHEESE1 - produced with pasteurized ewe milk and under Federal Inspection; CHEESE2 - produced with non-pasteurized ewe milk and under State Inspection) were offered to 68 non-trained evaluators. Most of the evaluators (58.8%) really liked Cheese 1 and, to a lesser extent, liked (37.9%) Cheese 2. Similarly, 50% and 41.2% of the evaluators surely would buy the products 1 and 2, respectively. Cheese 1 had higher acceptability and purchase intention. We could conclude that the decision to purchase a product is directly related to its acceptability.

Qualitative and quantitative analysis of bacteria from vaginitis associated with intravaginal implants in ewes following estrus synchronization / Análise qualitativa e quantitativa de bactérias da vaginite associadas com implante intravaginal em ovelhas após sincronização de estro

ABSTRACT: This study evaluated the presence of vaginitis and the bacterial load associated with different intravaginal implants in ewes. Twenty-four Dorper and crossbred ewes were allocated into three groups and received intravaginal implant containing 0.3g progesterone (CIDR(r)), 60mg MAP or sponges without progesterone (CONTROL) for six days. Then, CIDR and MAP treated-ewes received 12.5mg dinoprost and 300IU eCG. Vaginal mucus samples were collected at four times: before device insertion, at the day of its removal, 24 and 48 hours after. The samples were cultured and the colonies were counted (CFU/mL) and identified. The results obtained from the counting of CFU mL-1 were submitted to Kruskal-Wallis H test, with P<0.05 being considered significant. Before device insertion, 68.2% of the samples yielded Staphylococcus spp. and 60.0% of them were Staphylococcus aureus. After implant removal, 100% of ewes had clinical signs of vaginitis. However, the level of local infection in the CONTROL-ewes was lower (P>0.05) in comparison with MAP and CIDR-treated ewes. During the occurrence of vaginitis, the predominant isolates belonged to the coliform group, mainly Escherichia coli (72.7%). Such infection was not determined by the members of the vaginal microbiota that were present before implant insertion and normal microbiota was restored between 24 to 48 hours after insert removal.

RESUMO: Este estudo avaliou a presença de vaginite e contagem bacteriana associada ao uso de diferentes dipositivos intravaginais em ovelhas. Vinte e quatro fêmeas Dorper e mestiças foram alocadas em três grupos e receberam implante intravaginal contendo 0,3g de progesterona (CIDR(r)), 60mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP) ou esponjas sem progesterona (CONTROLE) por seis dias. Posteriormente, as ovelhas tratadas com CIDR e MAP receberam 12,5mg de dinoprost e 300 UI de eCG. Amostras do muco vaginal foram coletadas em quatro momentos: antes da inserção do dispositivo, no dia de sua retirada, 24 e 48 horas após. As amostras foram cultivadas e as colônias foram contadas (UFC mL-1) e identificadas. Os resultados obtidos da contagem das UFC mL-1 foram submetidos ao teste do qui-quadrado, com P<0,05 sendo considerado significativo. Antes da inserção do dispositivo, 68,2% das amostras continham Staphylococcus spp., sendo 60,0% delas Staphylococcus aureus. Após a remoção do implante, 100% das ovelhas apresentaram sinais clínicos de vaginite. Entretanto, o grau de infecção local nas ovelhas do grupo CONTROLE foi menor (P>0.05), em comparação com as ovelhas recebendo CIDR e MAP. Durante a ocorrência da vaginite, os isolados predominantes pertenciam ao grupo dos coliformes, principalmente Escherichia coli (72,7%). Tal infecção não foi determinada pelos membros da microbiota vaginal, que estavam presentes antes da inserção dos dispositivos, e a microbiota normal foi reestabelecida entre 24 e 48 horas após sua remoção.

Overview of anthelmintic resistance of gastrointestinal nematodes of small ruminants in Brazil / Panorama da resistência anti-helmíntica em nematoides gastrointestinais de pequenos ruminantes no Brasil

Abstract Frequent and inappropriate use of all classes of antiparasitic drugs in small ruminants has led to failures in their effectiveness, culminating in a global problem of anthelmintic resistance. Brazil stands out as one of the world’s leaders in publications about anthelmintic resistance, and for having the most numerous reports of this resistance in small ruminants in the Americas. These studies have involved mainly the fecal egg count reduction test (FECRT) and its correlation with field management practices. In vivoeffectiveness testing is conducted in areas where livestock is of greater economic significance, e.g., in the South (sheep) and Northeast (goats), or is important for research and economic centers, such as the Southeast (sheep). The most widely studied species is sheep, for which the widest range of drugs is also evaluated. Despite significant advances achieved in molecular research, laboratory analyses should include knowledge about the reality in the field so that they can become feasible for the producer. Moreover, molecular studies can be underpinned by the analysis of field studies, such as the maintenance of antiparasitic effectiveness over time and the mechanisms involved in this process.

Resumo O uso frequente e inapropriado de todas as classes de antiparasitários em pequenos ruminantes levou a falhas de eficácia, culminando na problemática global de resistência anti-helmíntica. O Brasil destaca-se como sendo um dos pioneiros nas publicações com resistência anti-helmíntica no mundo e por ter o maior número de relatos em pequenos ruminantes na América. Essas pesquisas envolvem principalmente o teste da redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF) e sua correlação com as práticas de manejo utilizadas no campo. Os estudos de testes de eficácia in vivo localizam-se em áreas onde há maior importância dos rebanhos como nas Regiões Sul (ovinos) e Nordeste (caprinos), ou com importância em polos de pesquisa e econômicos, como a região Sudeste (ovinos). Ovina é a espécie mais estudada e com maior gama de drogas avaliadas. Mesmo com grande avanço em pesquisas moleculares, as análises laboratoriais devem envolver o conhecimento da realidade do campo para que possam se tornar viáveis ao produtor. Além disso, a análise dos estudos de campo pode nortear estudos moleculares como, por exemplo, a manutenção da eficácia das drogas ao longo dos anos e os mecanismos envolvidos em tal processo.

Evaluation of a bovine pregnancy-associated glycoprotein enzyme-linked immunosorbent assay kit for serological diagnosis of pregnancy in sheep / Avaliação de um kit de ensaio imunoenzimático na detecção de glicoproteínas associadas à prenhez bovina para o diagnóstico sorológico de gestação em ovinos

ABSTRACT: Pregnancy diagnosis is an important tool for farm management. Ultrasonography is the main technique used for pregnancy diagnosis in ewes. As an alternative, radioimmunoassay (RIA) allows accurate and early detection of pregnancy-associated glycoproteins (PAGs) in sheep blood. However, radioactive-based techniques, as RIA, have been increasingly inadvisable due to environmental risk. Homology between ovine and bovine PAGs is high, and ELISA kits used for PAGs detection in cattle are safer than RIA. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of PAGs detection for pregnancy diagnosis in sheep serum samples using an ELISA kit produced for cattle. The sensitivity and specificity of the ELISA kit were 93.5% and 98.9%, respectively, whereas positive and negative predictive values were 99.0% and 93.1%, respectively, in comparison to ultrasonography diagnostic (control). PAGs reached consistently detectable concentrations in ovine serum around 33 days after mating. Accuracy of the ELISA test was 96.1% from 33 days of pregnancy until lambing. After parturition, PAGs were still detectable seven days post-lambing. However, from 21 days post-parturition, PAGs from the previous pregnancy were no longer detected in serum samples. In conclusion, the bovine ELISA kit can accurately detect pregnancy in sheep 33 days following mating, while PAGs levels from the previous gestation are no longer detected from 21 days post-partum. The evaluated ELISA test is a reliable tool for pregnancy diagnosis in sheep at random stages and as a complementary exam at early gestation.

RESUMO: O diagnóstico de gestação é uma ferramenta importante no manejo da propriedade. A ultrassonografia é a principal técnica utilizada no diagnóstico de prenhez em ovelhas. Como alternativa, o radiomunoensaio (RIA) permite acurácia e a detecção precoce de proteínas associadas à prenhez (PAGs) no sangue. No entanto, as técnicas radioativas, como o RIA, têm sido cada vez mais desaconselháveis, devido ao risco ambiental. A homologia entre PAGs de ovinos e bovinos é alta, e os kits de ELISA utilizados para a detecção de PAGs em bovinos são mais seguros do que RIA. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade de detecção de PAGs no soro ovino para diagnóstico de gestação em soro ovino, utilizando um kit de ELISA produzido para bovinos. A sensibilidade e a especificidade do kit de ELISA foram de 93,5% e 98,9%, respectivamente, enquanto que os valores preditivos positivo e negativo foram de 99,0% e 93,1%, respectivamente, em comparação com a ultrassonografia (utilizada como referência). As PAGs atingiram concentrações consistentemente detectáveis no soro ovino em torno de 33 dias após o acasalamento. A acurácia do teste de ELISA foi de 96,1% a partir de 33 dias de gestação até o parto. As PAGs ainda eram detectáveis sete dias pós-parto. No entanto, a partir de 21 dias após o parto, as PAGs da prenhez anterior já não eram detectadas no soro. Em conclusão, o kit de ELISA bovino pode detectar a prenhez com precisão em ovelhas a partir de 33 dias após o acasalamento, e os níveis de PAGs da gestação anterior não são detectados a partir de 21 dias pós-parto. O teste de ELISA avaliado é uma ferramenta confiável para o diagnóstico de gestação em ovelhas em estágios aleatórios e como exame complementar no início da gestação.